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3.2.1酶 用于ELISA的酶应符合以下要求：纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，制备成酶结合物后仍继续保留它的活性部分和催化能力.**在受检标本中不存在相同的酶.另外，它的相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等. 在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP).在少数商品ELISA试剂中，应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等.国产ELISA试剂一般都用HRP制备结合物.HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，分子量为44000，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质.主酶无色糖蛋白在275nm波长处有**高吸收峰，辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有**高吸收峰.HRP的纯度用RZ(Reinheit Zahl，德文，意为纯度数）表示，是403nm的吸光度与280nm吸光度之比，高纯度的HRP的RZ≥?.0. HRP除符合上述的ELISA中标记酶的要求外，更有价格低廉和性质较稳定的特点.值得注意的是，在选用酶制剂时，除其纯度RZ外，更应注意酶的活力.高纯度的酶如保存不当，活力也会降低.酶制剂的活力以所含的酶活力单位表示，可用对底物作用后生成产物量的测定进行试验.. 国外很多ELISA试剂采用碱性磷酸酶（AP）作为标记酶.常用的AP有两个来源，分别从大肠杆菌和小牛肠膜中提取.不同来源的酶生化特性特性略不相同，从大肠杆菌中提取的AP分子量为80000，酶作用的**适合pH为8.0；用小牛肠膜中提取的AP分子量为100000，**适pH为9.6.在ELISA中，AP系统的敏感度一般高于HRP系统，空白值也较低，但AP价格昂贵，制备结合物所得率也较HRP低.人循环免疫复合物进口ELISA试剂盒报价欢迎致电北京方程生物获取相关资料。
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人循环免疫复合物进口ELISA试剂盒报价洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败.ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的.通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质.聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来.可以说在ELISA操作中，洗涤是**主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎
保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡.为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上.若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，**后将ELISA板放在湿纱布上.湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此.无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡.室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育.室温温育时，ELISA板只要平置于操作台上即可.应注意温育的温度和时间应按规定力求准确.为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定
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可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液、分泌物和排泄物等均可作标本，以测定其中某种抗体或抗原成份，有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物），大部分ELISA检测均以血清为标本，血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清，制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得，除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本，在ELISA中血浆和血清可同等应用，血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色.
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