[IPTG的诱导原理在生物化工领域及化学实验室的应用]
IPTG(异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷)是一种目前**型作用极强的诱导剂,本身不能被细菌代谢而十分稳定,现在在国内外实验室,生物制药行业广泛应用。现在越来越多领域已经使用IPTG,在生产,制药,生物科技等领域发生着巨大的作用,为企业带来更大的效益,提高产品的质量和缩短产品反应时间。我公司是目前首家在国内自行生产的工厂,现在市面上在用的IPTG都是从国外进口的。从国外进口缺点:定货周期长,中途容易发生意外,每个批次质量不稳定,各个地区质量参差不齐等情况,非常不方便。而且现在我们的产品质量已经完全超越他们,价格上也有优势,发货定货流程简单**。
【IPTG的配制问题】:例如以IPTG,规格:2.5g/瓶的粉末剂为例;做详细说明!
1、100mM的IPTG是2.4gIPTG溶于100ml水中:按照标准的配法,它不应该直接溶于100ml水中;应该先溶于少于100ml 的水中。等溶解后再定容到100ml;.
2、在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22um滤器过滤除菌,分装成1ml小分储存与-20℃:
这个配的是20%的浓度,不是摩尔浓度。是储存液。实际用时通过计算加一定量就是了,便于保存。
3、可以根据实际情况可以配成以上任一种形式。
【重点说明】:真正做诱导实验时,**先要摸清楚**浓度。所以你用摩尔浓度或者百分浓度都没有任何关系。
【IPTG诱导原理】简要说明:
E.coli的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节 基因I(图15-4)。I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激 活蛋白(CAP)结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表 达 。在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态。此时,I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结 合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经b-半乳糖苷 酶催化,转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。